皮膚癌是發(fā)病率較高、較為常見的癌癥類型之一，而在眾多的皮膚癌類型中，黑素瘤是最危險(xiǎn)的一種。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)估計(jì)，每年因黑素瘤而死亡的患者數(shù)量達(dá)65,000例。其中約95%的黑素瘤都是因皮膚暴露于紫外線輻照下引發(fā)的。正是由于紫外線對皮膚的巨大殺傷作用，防曬霜對于使用者而言，其意義不僅僅是防止曬黑，更擁有降低黑素瘤發(fā)病幾率的重要意義。

市場上林林總總的防曬霜產(chǎn)品大多通過添加能主動過濾紫外線輻射的化學(xué)成分來實(shí)現(xiàn)“防曬”的作用，如果化學(xué)成分含量不足，則會讓防曬效果大打折扣，“防曬”名不副實(shí)。然而如果長期接觸過量的化學(xué)成分也可能增加皮膚對陽光過敏的風(fēng)險(xiǎn)。因此，我國《化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB7916-1987)明確規(guī)定了防曬產(chǎn)品添加的相關(guān)化學(xué)成分的含量。

對于化妝品生產(chǎn)商和監(jiān)管機(jī)構(gòu)、第三方檢測機(jī)構(gòu)而言，如果能夠同時(shí)檢測防曬霜配方中的多種成分，能夠大大提升其效率。在傳統(tǒng)的檢測方法中，業(yè)界通常使用HPLC進(jìn)行檢測，然而，由迄今為止已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)可以看出，HPLC分析方法存在一些缺點(diǎn)，例如會縮短HPLC級色譜柱的使用壽命并且/或者需要使用有毒溶劑等。 

針對這一需求，本文介紹了一種利用ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)與UV和質(zhì)譜檢測器聯(lián)用的方法，能夠在開發(fā)高效分離、檢測和定量分析防曬霜活性成分的分析方法時(shí)，準(zhǔn)確記錄方法開發(fā)行為。我們分別在Waters ACQUITY UPLC H-Class PLUS和ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)上使用兩種色譜柱填料對含有六種紫外線化學(xué)過濾劑的混合物進(jìn)行分離和檢測，然后測定并比較了兩套系統(tǒng)的典型系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)，結(jié)果表明兩套系統(tǒng)性能相當(dāng)。

解決方案

分析標(biāo)準(zhǔn)品購自Sigma-Aldrich Ltd(英國多塞特郡普爾)。使用水：甲醇 (60:40)配制濃度為25 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，供UPLC分析使用。使用ACQUITY UPLC HSS PFP色譜柱(1.8 m，2.1 x 50 mm，部件號：186005965)和ACQUITY UPLC BEH C8色譜柱(1.7 m, 2.1 x 50 mm，部件號：186002877)進(jìn)行UPLC分離，流速為0.5 mL/min，使用通用梯度：初始為40% B保持1 min，4.5 min時(shí)增加至95% B，隨后保持2.5 min，最后回到40% B，重新平衡1 min。流動相由A(水)和B(甲醇)組成，二者均含0.1%甲酸，進(jìn)樣體積為5 L。使用Empower 3 CDS軟件測定保留時(shí)間和峰面積，并計(jì)算五次重復(fù)進(jìn)樣的平均結(jié)果。

分別在ACQUITY UPLC H-Class和ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)上使用相同的流動相、梯度和進(jìn)樣體積，使用兩種色譜柱填料分析六種防曬霜活性成分。圖1是在兩套系統(tǒng)上使用ACQUITY UPLC BEH C8色譜柱分離六種化合物得到的色譜圖。圖2是在兩套系統(tǒng)上使用ACQUITY UPLC HSS PFP色譜柱分離同樣的六種分析物得到的色譜圖。如圖3所示，兩套系統(tǒng)分離所有目標(biāo)化合物得到的保留時(shí)間和峰面積都相當(dāng)。以%RSD來衡量保留時(shí)間重現(xiàn)性，ACQUITY UPLC H-Class和ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)的%RSD分別小于0.2%和0.04%。以上數(shù)據(jù)表明分析方法在ACQUITY UPLC H-Class和H-Class PLUS系統(tǒng)上均具有良好的重現(xiàn)性，因此，在ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)上驗(yàn)證過的分析方法可直接在ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)上運(yùn)行，無需進(jìn)行重新驗(yàn)證。

圖1. 分別在ACQUITY UPLC H-Class和ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)上使用ACQUITY UPLC BEH C8色譜柱填料分離各種防曬霜活性成分標(biāo)準(zhǔn)品得到的疊加色譜圖。

圖2.分別在ACQUITY UPLC H-Class和ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)上使用ACQUITY UPLC HSS PFP色譜柱分離各種防曬霜活性成分標(biāo)準(zhǔn)品得到的疊加色譜圖。

圖3. ACQUITY UPLC H-Class和ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)的代表性保留時(shí)間和峰面積數(shù)據(jù)。

總結(jié)：ACQUITY UPLC H-Class PLUS系統(tǒng)是一種穩(wěn)定可靠的分析技術(shù)，可準(zhǔn)確分析化妝品中的防曬霜活性成分。本系統(tǒng)具有卓越的重現(xiàn)性，有助于生產(chǎn)商在防曬霜生產(chǎn)的QC監(jiān)測中準(zhǔn)確鑒別批次間的差異。